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技術(shù)文章

二核苷酸(CpG)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書 競爭法

點擊次數(shù):14225   發(fā)布時間:2023/8/1 14:55:36

本試劑盒僅供研究使用。  

 

使用目的:

本試劑盒用于測定樣本中二核苷酸(CpG的含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本二核苷酸(CpG)水平。用純化的二核苷酸(CpG)抗體包被微孔板,制成固相體,往包被單抗的微孔中加入二核苷酸(CpG),和HRP標記的二核苷酸(CpG抗原,使它們競爭結(jié)合,經(jīng)過che底洗滌后底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的二核苷酸(CpG)的含量相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品二核苷酸(CpG)的含量。  

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

 

 

8

標準品S12400ng/L

0.5ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

標準品S21200ng/L

0.5ml×1

3

酶標包被板

12×8

標準品S3600ng/L

0.5ml×1

4

顯色劑A

6ml×1

標準品S4300ng/L

0.5ml×1

5

顯色劑B

6ml×1

標準品S5150ng/L

0.5ml×1  

6

終止液

6ml×1/

9

說明書

1

7

樣品稀釋液

6ml×1/

10

封板膜

2

 

標本要求 

1.標本處理:(1)水樣   采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,再經(jīng)玻璃纖維過濾后,備查

2)組織   樣品用丁醇:甲醇:水(52570 V:V:V)抽提,或按相關(guān)文獻提取進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,備查

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

 

1. 加樣:分別設(shè)標準孔、空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加50微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

2. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

7. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

8. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

 

檢測范圍:

50ng/L -2800ng/L

規(guī)格:

96/

保存條件及有效期

1試劑盒保存:2-8。

2.有效期:6個月

 

 

 

 

 

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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