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點擊次數(shù):14225 發(fā)布時間:2023/8/1 14:55:36
使用目的:
本試劑盒用于測定樣本中二核苷酸(CpG)的含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中二核苷酸(CpG)水平。用純化的二核苷酸(CpG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入二核苷酸(CpG),和HRP標記的二核苷酸(CpG)抗原,使它們競爭結(jié)合,經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的二核苷酸(CpG)的含量呈負相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中二核苷酸(CpG)的含量。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 |
8 | 標準品S1(2400ng/L) | 0.5ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 標準品S2(1200ng/L) | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 標準品S3(600ng/L) | 0.5ml×1瓶 | |
4 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標準品S4(300ng/L ) | 0.5ml×1瓶 | |
5 | 顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 標準品S5(150ng/L) | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 終止液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 說明書 | 1份 |
7 | 樣品稀釋液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 封板膜 | 2張 |
標本要求
1.標本處理:(1)水樣 采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,再經(jīng)玻璃纖維過濾后,備查
(2)組織 樣品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相關(guān)文獻提取進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,備查
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 加樣:分別設(shè)標準孔、空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加50微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
7. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
8. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
檢測范圍:
50ng/L -2800ng/L
規(guī)格:
96份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月
原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司
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