聯(lián)系我們/CONTACT US

聯(lián)系人：錢(qián)經(jīng)理

電話：13636351217

手機(jī)：13636351217，13636351073

地址：上海市松江臨港科技城漢橋文化科技園B座

郵編：201615

傳真：021-64881400

郵箱：2881726255@qq.com

阿儀網(wǎng)商鋪：http://www.app17.com/c60514/

手機(jī)網(wǎng)站：m.shhyswkj.com

產(chǎn)品分類/PRODUCT CLASS

技術(shù)文章

上海恒遠(yuǎn)為您解析如何確定ELISA抗原和抗體的稀釋倍數(shù)

點(diǎn)擊次數(shù)：15254 發(fā)布時(shí)間：2021/2/1 14:11:18

在運(yùn)用ELISA方法測(cè)定抗體方面，通常所用的方法稱為間接法，也是目常用的方法，其原理：間接法先用抗原包被于固相載體，這些包被的抗原必須是可溶性的，或者至少是微小的顆粒，經(jīng)洗滌，加入含有被測(cè)抗體之標(biāo)本，再經(jīng)孵育洗滌后，加入酶標(biāo)記抗抗體，(對(duì)人的標(biāo)本來(lái)說(shuō)即加酶標(biāo)抗人球蛋白IgG、IgM)，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色,底物降解的量，即為欲測(cè)抗體的量，其結(jié)果可用目測(cè)或用分光光度計(jì)定量測(cè)定。

操作步驟：

1.將抗原按5 μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)，100 μl /孔，4℃過(guò)夜。

2.次日PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘)。

3.加2％BSA封閉室溫1 h，200 μl /孔。

4.陽(yáng)性對(duì)照從10ug/ml，做倍必稀釋，待測(cè)血清從1：50做倍比稀釋，預(yù)試驗(yàn)后確定稀釋倍數(shù)及陽(yáng)性對(duì)照的起始濃度及稀釋數(shù)量（以可以做標(biāo)準(zhǔn)曲線為參數(shù)），室溫1h。

5.PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘)。

6.加入1：3000（不同公司有不同的推薦稀釋度） PBS－T稀釋的HRP標(biāo)記的山羊抗人IgG，100 μl /孔，室溫1h。

7.PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘)。

8.顯色，100 μl /孔，顏色變深后中止顯色，2M硫酸在BIO－RAD酶標(biāo)儀上讀數(shù)，可用ABTS，OPD，TMB等

上海恒遠(yuǎn)經(jīng)過(guò)數(shù)年的努力，已迅速成為集科研和生產(chǎn)為體的業(yè)化生物企業(yè)，產(chǎn)品暢銷國(guó)內(nèi)大部分地區(qū)，銷售額逐年穩(wěn)步提高，擁有雄厚的實(shí)力、合理的價(jià)格和優(yōu)良的服務(wù)，能夠及時(shí)解決和滿足客戶的各方面的需求，與國(guó)內(nèi)多家科研機(jī)構(gòu)、企業(yè)、高校建立了良好的長(zhǎng)期合作關(guān)系。如有需要，歡迎咨詢。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司