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晨時解讀:ELISA技術(shù)培訓之檢測樣品的處理技巧

點擊次數(shù)：14852 發(fā)布時間：2018/10/24 10:22:03

ELISA實驗的效果可不能完全依賴試劑盒產(chǎn)品，在我公司保證產(chǎn)品質(zhì)量的同時，您還需要注意保存、樣本、操作等等。今天上海恒遠帶您來看ELISA技術(shù)培訓之檢測樣品的處理技巧！供參考。

一、細胞裂解液
① 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細胞，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。
② 收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預冷的PBS潤洗3次。
③ 加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
④ 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。
⑤ 4℃10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

二、血清
這是*常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。
用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出)4℃1000×g離心20分鐘，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
采血過程中應避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導致檢測的假陽性。

三、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

四、細胞培養(yǎng)上清
取細胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

五、組織勻漿液
① 將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
② 將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充分
③ 將組織按一定的比例加入預冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數(shù))
④ 吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

六、尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min，取上清即可檢測。
總的來說，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應離心去除。
為了保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應在1周內(nèi)進行檢測。

*后，上海恒遠提醒您，還要保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結(jié)果。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司