對剛做ELISA實驗的同學們都有一個困擾，做出來的數據該怎么分析？對數據處理一直不是很清楚，做出的結果誤差較大。那么，為什么ELISa實驗結果誤差較大呢？今天上海恒遠帶大家從以下幾個方面分析：
一、加 樣
1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）；
3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
4.標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
5.加樣后及時放入孵箱。
6.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
7.如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 8.標本較多時，請分批操作。
二、孵 育
1.孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；
2.孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。
3.貼封片或加蓋；
4.按說明步驟嚴格控制操作時間。
三、洗 板
1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。
3.反應板過多造成洗板等待時間長。
4.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
5.合理安排，或多用幾臺洗板機。
顯 色
6. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
7. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
8. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
9. 加樣時保持顯色劑不外流；
10.A、B液應避免接觸金屬器械。
四、終 止
加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。
加終止液時應避免產生氣泡。
五、讀 板
讀板時板底不清潔。
應保證酶標板清潔。
六、全過程
1.整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;
2.實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。
在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量�，F在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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