眾所周知，ELISA 是蛋白定量檢測的金標準。但是樣本的采集、處理及保存方法對 ELISA 實驗的成功有至關(guān)重要的作用。所以為了您ELISA 實驗準確、順利的進行，現(xiàn)利用我們公司在 ELISA 實驗中積累的精益技術(shù)和豐富經(jīng)驗，將在 ELISA 實驗中遇到的常見樣本采集、處理、保存方法予以歸納、匯總，為您實驗的成功打好基礎(chǔ)。另外，針對不同的檢測試劑盒或許有不同的樣本處理方法，請參照您所購買試劑盒中的處理方法。特殊樣本的具體采集處理保存方法請參考我們上海恒遠生物上的文章或相關(guān)參考文獻。

常見樣本采集方法：
血清：全血在室溫自然凝固30分鐘后，1000g離心30分鐘，小心收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：根據(jù)試劑盒要求選擇合適的抗凝劑，與全血混合 20 分鐘后，1000g離心30分鐘，小心收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)液300 g離心10分鐘去除沉淀物，，仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
所有標本收集完成后，應(yīng)及時分裝放在-20℃或-70℃條件下保存，避免反復(fù)凍融。如果在24 小時內(nèi)檢測，樣本可以存放在 2-8℃。在分析前，冷凍樣本應(yīng)該緩慢的恢復(fù)至室溫，輕柔地混勻。

注意事項：
（1）要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以 HRP 為標記酶的 ELISA 測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的 HRP 底物反應(yīng)顯色。
（2）樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染。一則細菌所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會對用相應(yīng)酶標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
（3）血清樣本如果是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應(yīng)在-70℃以下凍存。
（4）冰凍保存的血清樣本須注意避免反復(fù)凍融。樣本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力會對樣本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融樣本的混勻亦應(yīng)注意，不要進行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
（5）樣本保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。

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原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司