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上海恒遠告知:免疫組化遇到的問題及其解決辦法

點擊次數(shù):14873   發(fā)布時間:2016/3/14 11:00:25

上海恒遠告知:免疫組化遇到的問題及其解決辦法
1、
染色過強

原因

解決辦法

抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長 降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體)抗體孵育時間:室溫1小時或4℃過夜
孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃ 一般室溫20-28℃
DAB顯色時間過長或DAB濃度過高 顯色時間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準

2、非特異性背景染色

原因

解決辦法

操作過程中沖洗不充分 每步?jīng)_洗3×5
組織中含過氧化物酶未阻斷 可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時間延長
組織中含內(nèi)源性生物素 正常非免疫動物血清再封閉
血清蛋白封閉不充分 延長血清蛋白封閉時間

3、染色弱

原因

解決辦法

抗體濃度過低,孵育時間過短 提高抗體濃度,孵育時間不能少于60分鐘
試劑超過有效使用期 及時更換試劑
操作中,滴加試劑時緩沖液未瀝干,致使試劑稀釋 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥)
室溫太低,低于15℃ 若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過夜)
蛋白封閉過度 封閉時間不要超過10分鐘

4、染色陰性

原因

解決辦法

操作步驟錯誤 重新試驗,設(shè)立陽性對照
組織中無抗原 設(shè)立陽性對照片,以驗證實驗結(jié)果
一抗與二抗種屬連接錯誤 仔細確定一抗與二抗種屬無誤

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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