大鼠γ干擾素檢測試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠γ干擾素(IFN-γ)水平。用純化的大鼠γ干擾素(IFN-γ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ)，再與HRP標(biāo)記的γ干擾素(IFN-γ)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠γ干擾素(IFN-γ)濃度。

代測樣本要求注意事項(xiàng)：

1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3)，因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。

4. 實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

5. 酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

6. 建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

7. 牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

8. 本試劑盒定量范圍為75pg/ml-2400pg/ml，超過此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果(75pg/ml-2400pg/ml范圍內(nèi))，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本*終濃度。

9. 若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間。

10. 為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。

11. 試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。

12. 底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司