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2014最新人半胱氨酸蛋白酶抑制劑ELISA試劑盒操作說明

點(diǎn)擊次數(shù)：15141 發(fā)布時(shí)間：2013/11/8 8:49:14

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人半胱氨酸蛋白酶抑制劑elisa試劑盒操作步驟：

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在 37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻

時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符

合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)

樣品 100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板

加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120 分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A 工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加

上覆膜, 37℃反應(yīng) 60 分鐘。

3. 溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡 1-2 分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也

可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B 工作液（同檢測(cè)A 工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng) 60 分鐘。

5. 溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，每次浸泡 1-2 分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍

將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜 37℃避光顯色（30 分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4

孔有明顯的梯度蘭色，后3-4 孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入

順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD 值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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