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上海恒遠(yuǎn)與您分享酵母細(xì)胞RNA的提取與沉淀分離

點(diǎn)擊次數(shù)：15166 發(fā)布時間：2013/10/10 11:34:15

酵母細(xì)胞置于含有SDS的緩沖溶液中，加等體積的苯酚水溶液，通過激烈振蕩一段時間，將RNA和蛋白質(zhì)分開，然后離心分層，RNA溶于上層水溶液中，DNA和蛋白質(zhì)在酚相。RNA可用乙醇沉淀析出。

一、原理：酵母細(xì)胞置于含有SDS的緩沖溶液中，加等體積的苯酚水溶液，通過激烈振蕩一段時間，將RNA和蛋白質(zhì)分開，然后離心分層，RNA溶于上層水溶液中，DNA和蛋白質(zhì)在酚相。RNA可用乙醇沉淀析出。
二、材料與試劑：新鮮濕酵母、SDS-Tris緩沖液（0.3％SDS，0.01MMgCL₂，0.1MTris，用HCL調(diào)至PH7.2）、苯酚水溶液（90％，W/V）、20%乙酸鉀水溶液、95％乙醇
三、操作方法
1、取10ml酵母濃縮液（約5g左右濕酵母），加入4mlSDS-Tris緩沖液，再加入6ml90％苯酚水溶液。
2、在室溫激烈振蕩1h，然后冷卻至0－4℃，以下操作均在0－4℃進(jìn)行。
3、上述提取液以4000r/min，離心5min。
4、分離出上層水相加入1/10體積的乙酸鉀溶液，再加入2倍體積的95％乙醇。在－16℃作于放置使rna沉淀析出。此沉淀可在冰箱中長期保存。

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