：plko.1-trc克隆載體

財(cái)團(tuán)的干擾

1的plko。克隆載體骨干，技術(shù)聯(lián)盟（券）建了一個(gè)圖書(shū)館的發(fā)夾針對(duì)15000人和15000小鼠基因。addgene正與真相與和解委員會(huì)使這個(gè)狀克隆載體提供給科學(xué)界。請(qǐng)舉北陸等人。，2006月；124（6）：1283-98（醫(yī)學(xué)）在所有出版物引起使用這種載體。

1 plko數(shù)碼地圖。

plko。1是一個(gè)不稱職的慢病毒載體選擇的真相與和解委員會(huì)表達(dá)發(fā)夾。plko。1可引入細(xì)胞通過(guò)直接轉(zhuǎn)染，或可轉(zhuǎn)換成慢粒子隨后感染的靶細(xì)胞系。一經(jīng)推出，嘌呤霉素抗性標(biāo)記編碼plko 1允許方便穩(wěn)定的選擇。

圖1：圖1 plko含有狀插入。原plko.1-trc克隆載體有一1.9kb填充物是由消化上井和限制性。狀核苷酸克隆到上井和限制性網(wǎng)站中的填充物。在上井現(xiàn)場(chǎng)銷毀在大多數(shù)情況下（取決于靶序列），而限制性網(wǎng)站保存。一個(gè)完整的地圖plko。1載1.9kb填塞，訪問(wèn)www.addgene.org/10878。

描述向量元素

U 6人U 6啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)聚合酶轉(zhuǎn)錄三代狀記錄。

cppt中央polypurine道，cppt，改善傳導(dǎo)效率，促進(jìn)核進(jìn)口的載體”的國(guó)家的復(fù)雜的細(xì)胞的轉(zhuǎn)。

hpgk人力磷酸激酶啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)嘌呤。

嘌呤霉素抗性基因選擇是選擇plko 1質(zhì)粒在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中。

3 ＇＇ltr 3 ＇ ＇鈍長(zhǎng)末端重復(fù)。

F1山F1細(xì)菌復(fù)制的起源。

安培的氨芐青霉素抗性基因選擇plko 1質(zhì)粒在細(xì)菌細(xì)胞。

市局山市局細(xì)菌復(fù)制的起源。

5 ＇＇ltr 5 ＇長(zhǎng)末端重復(fù)。

債轉(zhuǎn)速反應(yīng)元件。

圖2：細(xì)節(jié)狀插入。該U 6啟動(dòng)子指導(dǎo)核糖核酸轉(zhuǎn)錄聚合酶三狀。狀包含21個(gè)“意義”的基礎(chǔ)是相同的目標(biāo)基因，一個(gè)環(huán)包含一個(gè)xhoi限制的網(wǎng)站，和21的“反”的基礎(chǔ)，是相輔相成的“意義”基地。狀其次是polyt終止序列聚合酶三。

. 3的相關(guān)產(chǎn)品

以下質(zhì)�？�從addgene建議使用與plko 1 trc-cloning向量。

質(zhì)粒（addgene身份#）描述

plko。1 -真相與和解委員會(huì)的控制（10879）陰性對(duì)照載體插入發(fā)夾。

plko。1 -爭(zhēng)奪狀（1864）陰性對(duì)照載體炒狀。

pspax2（12260）包裝質(zhì)粒生產(chǎn)病毒顆粒。

pmd2。克（12259）信封質(zhì)粒生產(chǎn)病毒顆粒。

注：plko。1也可以用來(lái)與包裝質(zhì)粒和pcmv-dr8.2（addgene # 8455）和包膜質(zhì)粒pcmv-vsvg（addgene # 8454）從羅伯特溫伯格的實(shí)驗(yàn)室。更多信息，訪問(wèn)addgene ＇的哺乳動(dòng)物干擾工具頁(yè)。

其他幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)plko衍生載體，也可能是有用的實(shí)驗(yàn)。看到這些載體，訪問(wèn)addgene ＇的網(wǎng)站和搜索”plko”。

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B .設(shè)計(jì)為1 plko狀寡核苷酸。

B . 1確定*佳21濱海目標(biāo)在你的基因

選擇合適的21濱海目標(biāo)基因的步是有效的基因沉默。方法選擇目標(biāo)的不斷提高。以下是建議為目標(biāo)的選擇。

1。使用中的選擇工具來(lái)確定一組得分的目標(biāo)，你的基因。例如，懷特海生物醫(yī)學(xué)研究所主辦了一個(gè)基因選擇程序，可以訪問(wèn)后，免費(fèi)注冊(cè)（網(wǎng)址：/ /侏羅。我。麻省理工學(xué)院。”/ bioc / sirnaext /）。如果你有機(jī)會(huì)，另一個(gè)很好的程序irnai，這是免費(fèi)提供的公司mekentosj（網(wǎng)址：http : / / / www.mekentosj。irnai /）。

總結(jié)準(zhǔn)則設(shè)計(jì)的siRNA與有效的基因沉默是包含在這里：

從25nt下游的起始密碼子（球蛋白），搜索21nt序列匹配模式機(jī)管局（n19）。如果沒(méi)有合適的匹配，搜索納爾（*新）ynn，沒(méi)有任何核苷酸，是嘌呤（一，克），并是一個(gè)嘧啶（丙，你）。

氣相色譜法的內(nèi)容應(yīng)該是36-52 %。

3’端應(yīng)具有較低的穩(wěn)定性–至少一一或之間的位置- 19。

避免針對(duì)內(nèi)含子。

避免的4個(gè)或多個(gè)核苷酸重復(fù)，尤其是因?yàn)?/span>重復(fù)polyt是終止信號(hào)的核糖核酸聚合酶三。

2。減少退化的目標(biāo)基因，利用美國(guó)的高爐項(xiàng)目。選擇序列，至少有3個(gè)核苷酸錯(cuò)配的所有基因無(wú)關(guān)。

addgene建議你選擇多目標(biāo)序列為每個(gè)基因。一些序列將乙

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